背景介绍

裸露的RNA是一种带负电荷的亲水性大分子，因细胞膜的静电排斥，难以直接进入细胞，同时也易被RNA酶迅速降解。因此，RNA需要一个保护性外壳才能成功进入细胞。细胞膜主要由脂质组成，通过脂质囊泡将RNA包封，从而穿过细胞膜并将RNA释放到细胞质中。囊泡必须是带正电的脂质，以便能与带负电的RNA结合。然而，由于由永jiu性阳离子脂质组成的囊泡可能与带负电的细胞膜发生静电相互作用，导致细胞毒性。因此，脂质的结构必须能对内体酸性环境做出响应，并在此环境下保持正电荷。

脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分共同作用，确保脂质纳米粒能够有效携带mRNA。

脂质纳米粒递送机制

LNP作为mRNA传递系统的机制涉及多个步骤，以确保mRNA安全有效地递送到目标细胞并表达蛋白。在LNP中，可电离的阳离子脂质在这一过程中发挥霸主作用。在自组装形成LNP时，它可以带的正电荷帮助负载mRNA，在中性pH条件下保持无电荷，以降低毒性；而在细胞吸收后，随着内体pH的降低，它又会恢复正电荷，促进内体逃逸。胆固醇和PEG脂质的变体可以调节LNP的物理性质和最终功效，而两性离子磷脂则被称为“辅助脂质”。这些LNP在保护mRNA、促进细胞内传递及激活免疫反应中都发挥着关键作用。

LNP转染实验步骤

下述转染步骤为6孔板单孔参考条件，其他培养形式请参考下表：

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以确保均匀。
3. 加入细胞：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，并轻轻晃动以使其均匀分散。
4. 分析时间：在培养24-48小时后进行分析。

mRNA转染指南

细胞培养器类型	mRNA预混液准备量	mRNA-easyLNP复合物准备量	加入细胞量
96孔板	40ng/μL	5μL
24孔板	12μL	25μL
6孔板	60μL	125μL

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