细胞培养与处理指南

在进行细胞培养时，优质的培养条件是至关重要的。对于A-498细胞系，这是一种源自52岁女性肾癌患者的细胞，推荐的培养气相为95%空气与5%二氧化碳，培养温度为37℃，使用的培养基为MEM加10% FBS和1% P/S。

细胞传代方法

首次传代时建议采用1:2的比例进行传代。传代后，每两天更换培养液，以确保细胞的健康生长。处理细胞时，请遵循以下步骤，以确保细胞在运输后的良好状态：

1. 收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。
2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复稳定状态。
3. 通过显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后保障的依据。

细胞培养步骤

对于贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS溶液润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后显微镜下观察细胞状态。
3. 当细胞大部分变圆并脱落时，立即用5ml以上的完全培养基终止消化。
4. 将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 根据1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的传代可以采用以下两种方法：

1. 半换液法

将培养瓶竖着放置，静置1小时左右，轻轻吸掉3ml培养基，补加3ml完全培养基。如果培养基变色较慢，可以直接添加约500ul FBS，传代时直接补充5ml培养基。

2. 离心换液法

在分瓶时，将细胞悬液收集到离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重新悬浮。根据1:2的比例将细胞悬液分至新T25瓶中，并按要求添加6-8ml完全培养基以维持细胞生长。

细胞冻存与复苏

细胞冻存过程如下：

1. 当细胞覆盖培养瓶约80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使其脱落，转移至离心管中。
3. 在1000 RPM下离心5分钟后，弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃环保冰箱，24小时后再转入液氮罐。

尊龙凯时提供的细胞培养解决方案确保细胞在运输和培养过程中的高效保护与活力。请遵循上述方法，以确保最佳的细胞培养和处理效果。

注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因为不牢固而脱落，这是正常现象。如果脱落的细胞较多，建议收集所有培养液，进行离心并去除上清后，加入胰酶和完全培养基进行重悬和传代操作。

通过上述细致的细胞培养和处理步骤，您可以最大限度地维护细胞的活力和功能，确保实验的成功和结果的可靠性。选择尊龙凯时，为您的科研提供专属细胞培养支持。