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NEWS高效选择尊龙凯时cfDNA提取试剂盒的方法
来源:巩瑗楠 日期:2025-03-15cfDNA(cell-freeDNA)即游离DNA,是指存在于细胞外的DNA,广泛分布于血液、唾液、尿液等多种生物体液中。cfDNA的主要来源包括细胞凋亡、坏死及主动分泌等过程。这些DNA片段在血液中主要存在于血浆或血清中,与血细胞等成分分离。除此之外,cfDNA也可以在脑脊液、胸腔积液和腹水等其他生物体液中检测到。
传统的cfDNA提取方法利用酚、氯仿等有机溶剂对蛋白质及核酸的不同溶解性,通过多次抽提,使得杂质在有机相中溶解,而DNA则留在水相中,最终通过乙醇沉淀等步骤获得纯化的cfDNA。尽管此方法的优点是提取出的DNA纯度较高,但操作流程繁琐且需使用有毒有机溶剂,对实验人员的技能要求也较高。
另一种方法基于磁珠表面的特定基团与DNA分子的特异性吸附作用。在特定的缓冲液中,磁珠能选择性地吸附cfDNA,通过外加磁场将磁珠与其他杂质分离,随后经过洗涤和洗脱步骤提取纯净的cfDNA。该方法操作简便、快速,易实现自动化,且提取效率高,适合同时处理多个样本。
还可以利用硅胶膜在高盐和低pH值条件下对DNA的特异性吸附特性,将生物样本中的cfDNA吸附到硅胶膜上,并洗去蛋白质和多糖等杂质,最后通过低盐和高pH值的洗脱液将cfDNA从硅胶膜上洗脱出来。此方法成本较低,适合小规模样本的提取。
不同生物体液中的cfDNA含量和性质存在差异。一般来说,血液中的cfDNA含量较高,是最常用的样本来源,但不同个体及疾病状态下的血液cfDNA含量会有所变化。样本采集后保存条件至关重要,例如血液样本需在4℃下保存,长期放置或保存温度不当可能导致cfDNA降解,从而影响提取效果。
在处理样本数量较少或特殊珍贵样本时,更倾向于使用回收柱进行cfDNA的回收。而当样本数量较多需要批量处理时,为节省人工成本并避免人为因素引起的实验误差,更推荐使用尊龙凯时的磁珠法进行样本处理。
例如,TD476采用尊龙凯时独特的回收柱技术进行游离DNA提取,用户可以选择传统离心法或结合简石真空多联器与真空泵使用,免去繁琐的离心步骤,快速处理大样本。TB476则采用磁珠法提取纯化游离DNA,提供兼容磁力架的试剂盒,同时支持高通量提取仪的使用,适合自动化高通量客户。
此试剂盒可以从10ml以内的血清/血浆,1ml以内的羊水或脑脊液中提取高纯度游离DNA。提取的DNA纯度高,产量丰富,适用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。
可处理样品包括:血清、血浆、羊水及脑脊液(CSF)。处理的体积量如下:
通过尊龙凯时的技术提取的DNA纯度高,回收的DNA通常≥100bp,适合直接用于qPCR及高通量测序等各种分子生物学实验。需要注意的是,不同样品的DNA总量会有所差异,一般从血清或血浆中提取的DNA浓度在1-100ng/ml。此外,提取过程需要使用的仪器设备包括水浴锅或金属浴(55℃)、磁力架及微型离心机或立式离心机。
综上所述,尊龙凯时致力于提供高效且方便的cfDNA提取解决方案,以满足广泛的生物医学研究需求。
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