在细胞培养领域，细胞通常被分为两大类：贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞需要依附于培养皿表面才能生长，而悬浮细胞则可以在液体培养基中自由漂浮与繁殖。一般认为，只有贴壁细胞需要考虑培养皿的表面特性，使用胶原蛋白或多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等材料增强附着力。然而，若您以为“悬浮细胞永远不需要包被”，那您可能会被它们外表的飘逸所迷惑。实际上，在一些实验操作中，悬浮细胞也可能需要临时“靠岸”，甚至对包被表面产生依赖。今天我们探讨一下：悬浮细胞为何有时需要包被？如何进行包被，且适用于哪些实验场景？

悬浮细胞并非永远不附着

在细胞培养的世界里，悬浮细胞的特性使得它们在许多情况下需要采取包被策略，以增强实验的可重复性和数据的可靠性。

什么是多聚赖氨酸（PLL）包被？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种人工合成的阳离子多肽，拥有丰富的氨基基团，整体带有强正电荷。由于细胞膜表面通常呈现负电，PLL能够通过静电作用将细胞“吸附”在表面，广泛应用于初代神经元、干细胞等难以贴壁细胞的培养、组织切片或细胞爬片染色的固定以及增强某些表面抗体或细胞的结合力。在贴壁细胞中，PLL包被可以提升细胞附着的速度和均匀性；而在悬浮细胞中，PLL更多用于短期固定和功能性实验的搭配。

悬浮细胞需要包被的常见场景

1. **免疫荧光成像与免疫染色**：悬浮细胞在普通培养皿中操作时，容易在洗涤过程中被吸头吸走或漂移，影响成像效果。将细胞放置于PLL包被的玻片或培养皿中，可以实现短时间的固定，提高图像稳定性和信噪比。

2. **电转染后细胞收集**：在电转染之后，悬浮细胞在恢复期往往比较脆弱，如直接离心收集，可能会损失大量活细胞；在PLL包被的板底短暂培养4-6小时，让部分细胞附着后再收集，有助于提高后续转染效率及活性细胞比例。

3. **细胞富集或原位功能检测**：一些实验需要在细胞“原位”观察反应，例如ELISPOT、细胞毒性检测。这类实验对细胞分布和位置的稳定性要求较高，因此经常使用PLL或细胞外基质进行包被固定悬浮细胞。

4. **悬浮细胞低密度培养聚团问题**：在低密度培养中，悬浮细胞可能因漂浮过快而无法扩增，或形成异常聚团影响观察。适当的包被有助于形成“锚点”，减少细胞间的漂浮干扰。

5. **外泌体/病毒收集实验中的细胞定点处理**：在外泌体研究中，为保持细胞的分泌稳定状态，常在轻度PLL包被条件下固定悬浮细胞，以避免因漂浮密度差异影响上清产物的一致性。

如何正确使用PLL包被？

在悬浮细胞的实验中，包被并非旨在使它们长时间“贴壁”。通常情况下，这种包被的目的在于短期固定、提高操作效率及成像质量，同时增强细胞在某些实验平台上的一致性。需要注意的是，长时间附着可能会影响细胞状态及其生物学特性，因此应合理设置处理时间和强度。

什么时候不应使用包被？

并非所有悬浮细胞实验都需要包被。在以下情况下，应避免使用包被：
🚫 长期培养的悬浮细胞，如293F在生物反应器中培养，应避免包被，而需使用低附着力培养皿（如聚HEMA处理）。
🚫 在需要完全无附着状态的实验中，如某些流式功能检测，包被可能影响结果的真实性。

总结

悬浮细胞在特定情况下也需要“靠岸”。无论是为了成像、细胞收集、固定或维持操作的稳定性，适当的表面包被（如PLL）在关键环节能够显著提高实验的成功率和数据质量。科学实验强调适时适地，采用包被是关键小技巧之一，而尊龙凯时正致力于提供生物医疗领域相关的全面解决方案。